Trizol 使用说明书

本产品仅限于专业人员的科学研究用，不得用于临床诊断或治疗，不得用于食品或药
品。
一、分离纯化的基本原理
研究基因的表达和调控时常常要从组织和细胞中分离和纯化 RNA。RNA 质量的高低常常影响
cDNA 库，RT-PCR 和 Northern Blot 等分子生物学实验的成败。Trizol 是一种新型总 RNA 抽提试
剂，内含异硫氰酸胍等物质，能迅速破碎细胞，抑制细胞释放出的核酸酶。
二、用户需自备的试剂和材料
无水乙醇、氯仿、Glycogen（可能需要）、 1.5ml Eppendorf 管（RNase-free）、 Tips
（RNase-free）
三、准备工作
RNase 酶非常稳定，是导致 RNA 降解最主要的物质。它在一些极端的条件可以暂时失活，但
限制因素去除后有迅速复性。用常规的高温高压蒸气灭菌方法和蛋白抑制剂都不能是 RNase 完全
失活。它广泛存在于人的皮肤上，因此，在与 RNA 制备有关的分子生物学实验时，必须戴手套。
RNase 的又一污染源是取液器，根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用用
DEPC 配制的 70%乙醇擦洗取液器的内部和外部，基本达到要求。取 RNase-free 的物品时必须戴
手套。
1、 料制品的处理
尽可能使用无菌，一次性塑料制品，已标明 RNase-Free 的塑料制品，如没有开封使用过通
常没有必要再次处理。对于国产塑料制品，原则上都必须处理方可使用。处理步骤如下：
1）在玻璃烧杯中注入去离子水，加入 DEPC 使 DEPC 的终浓度为 0.1%。注意：DEPC 为剧毒物，活性很强，小心在通风柜中使用。
2）处理的塑料制品放入一个可以高温灭菌的容器中，注入 DEPC 水溶液，使塑料制品的所有部分
都浸泡到溶液中。
3）在通风柜中室温处理过夜。
4）将 DEPC 水溶液小心倒到废液瓶中，用铝箔封住含已 DEPC 水处理过的塑料制品的烧杯，高温
高压蒸气灭菌至少 30 分钟。
5）烘箱用合适的温度烘拷至干燥。置于干净处备用。
2、 璃玻和金属物品250°C 烘烤 3 小时以上。

四、从组织中提取总 RNA
1)液氮研磨，组织块直接放入研钵中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，
再研磨，如此三次，按 50-100mg 组织/ml Trizol 加入 Trizol，转入离心管进行第 2 步操作。
2) 匀浆：组织样品按 50-100mg/mlTrizol 加入 Trizol。另外，组织体积不能超过 Trizol 体积
的 10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需 1-2 分钟。
五、从细胞中提取总 RNA
1) 培养贴壁细胞：不须消化，可直接用Trizol进行消化、裂解，Trizol体积按 10cm2
/ml比例加入。
2) 悬浮细胞可直接收集、裂解，每 1ml Trizol可裂解 5×106动物、植物或酵母细胞，或 10
7细菌细胞。